Лимфоциты при миоме матки

— [ Страница 3 ] —

Количественное определение основных субпопуляций лимфоцитов периферической крови, осуществленное с помощью проточной цитометрии, показало, что относительное содержание различных популяций лимфоцитов у 46 обследованных пациенток не выходило за пределы популяционной нормы (контрольная группа, n=50) (Тотолян А.А. и соавт., 1999) (р>0,05). Сопоставление данных иммунофенотипирования лимфоцитов периферической крови у больных миомой матки в зависимости от наличия или отсутствия клинических проявлений заболевания выявило достоверное увеличение относительного содержания В-лимфоцитов (CD3–CD19+) в группе пациенток, у которых миома матки протекала с клиническими проявлениями (р=0,045). Определено значимое увеличение относительного содержания В-лимфоцитов (CD3–CD19+) (р=0,035) и натуральных киллеров (CD3–CD(16+56)+) (р=0,025) у пациенток с пролиферирующей формой миомы матки по сравнению с больными, имевшими простую форму опухоли, что позволяет предполагать активацию этих субпопуляций при множественности миоматозных узлов и ускоренном росте опухоли. Выявлена связь частоты развития меноррагий и высокого содержания Т-лимфоцитов (CD3+CD(16+56)–) (p<0,05) и Т-киллеров (CD3+CD(16+56)+) (p<0,05). По всей видимости, увеличение содержания Т-лимфоцитов является вторичным. Описанный феномен обязан своим возникновением активизации клеточного звена иммунной системы в ответ на развитие осложненной формы заболевания, а также может быть маркером инфекции, играющей роль в индукции развития миомы матки, о чем свидетельствуют данные литературы (Малышкина А.И., 2006; Тихомиров А.Л., 2006).

В то же время, при множественной миоме отмечалось повышение доли CD4+8– (р=0,004) лимфоцитов, что может служить признаком общей активации афферентного звена клеточного иммунного ответа при увеличении числа очагов и массы опухоли. Об этом же свидетельствует более высокое содержание CD4+8– (р<0,05) лимфоцитов у больных миомой матки, сопровождавшейся меноррагиями.

Таким образом, выявленные отклонения в субпопуляционном составе лимфоцитов периферической крови были наиболее выражены при течении заболевания, сопровождавшемся клиническими проявлениями: наличием меноррагий, ростом опухоли, а также при многоузловых формах миомы матки. Возникающие при развитии заболевания нарушения в относительном содержании тех или иных субпопуляций лимфоцитов являются отражением прогрессии опухолевого процесса в миометрии.

При сопоставлении результатов генетического и иммунологического исследования было обнаружено, что имеется связь между аллелями/гаплотипами промоторных аллелей генов ММР-1 и ММР-3 и представленностью субпопуляций лимфоцитов в периферической крови больных миомой матки: носительство аллеля 2G гена ММР-1 ассоциировано с увеличением относительного содержания в периферической крови натуральных киллеров CD3–(16+56)+ (р=0,03). У пациенток – носителей промоторного аллеля 1G гена ММР-1 наблюдалось увеличение относительного содержания Т-киллеров (СD3+(16+56)+) (р=0,007). Выявлена обратная корреляционная связь между аллелем 6А ММР-3 и содержанием Т-хелперов (CD4+8–) (p=0,002). Относительное содержание CD3–19+ и CD3–(16+56)+ лимфоцитов значительно повышено у пациенток – носителей гаплотипа 2G ММР-1/5А ММР-3 (p=0,01 и p=0,04, соответственно). Гаплотип 1G ММР-1/6А ММР-3 имел обратную корреляцию с относительным содержанием в периферической крови клеток CD3+(16+56)+ (p=0,01) и прямую – с содержанием CD4+8– (p=0,008).

Расселение и пролиферация лимфоидных клеток в организме тесно связаны с их способностью к миграции. В этом процессе важную роль играют активация и экспрессия матриксных металлопротеиназ. В нашем исследовании показано повышение относительного содержания в крови натуральных киллеров (NK-клеток) у больных с гиперактивным генотипом ММР-1 2G/2G. Этот результат согласуется с данными S. Goda и соавт. (2006), свидетельствующими об усилении продукции ММР-1 натуральными киллерами при их активации хемокином CXCL12, что предполагает повышенную деградацию коллагенового матрикса при индукции данного гена у больных с гиперактивным генотипом. Взаимосвязь между менее активным гаплотипом (ММР-1 1G/ММР-3 6А) и относительным содержанием CD4+ Т-клеток, обнаруженная в нашем исследовании, может быть объяснима различной динамикой программированной гибели этих клеток в организмах с разным генотипом ММР. Меньшая активность ММР (связанная, например, с менее активным вариантом 1G гена ММР-1), напротив, ассоциирована с большей интактностью Fas-лиганда и повышенными уровнями CD4+ лимфоцитов в кровотоке. С другой стороны, при деструктивно-воспалительных процессах в организме, в частности аутоиммунных заболеваниях, матриксные металопротеиназы и фрагменты их молекул могут играть роль мишеней для распознавания и привлечения Т-клеток в зоны воспаления (van Bilsen et al., 2004). В таком случае, пониженные уровни экспрессии ММР-1 (генотип 1G) или ММР-3 (генотип 6A) могут быть причиной менее выраженной миграции CD4+ лимфоцитов в ткани и их персистенцией в периферической крови.

Особенности экспрессии цитокинов в перитонеальной жидкости у больных миомой матки

Локальный иммунный ответ, изучавшийся на основании особенностей экспрессии цитокинов в перитонеальной жидкости больных миомой матки, показал, что на местном уровне иммунные изменения при опухолевом росте более выражены, чем на системном.

С целью изучения роли цитокинов, обусловливающих развитие Th1- (клеточного) либо Th2-типа (гуморального) ответа у пациентов с миомой матки, было проведено клиническое обследование 27 пациенток: 20 женщин, имевших миому матки (основная группа) и семи – не имевших миомы матки (группа сравнения), которым проводилась диагностическая лапароскопия в связи с трубной формой бесплодия.

Результаты проведенного исследования показали достоверное повышение уровня IL-10 у пациенток с миомой матки при сопоставлении с группой сравнения (р=0,016). При дальнейшей статистической обработке уровень цитокинов у пациенток с миомой матки был проанализирован в зависимости от клинических вариантов течения заболевания. Были выявлены достоверно повышенные уровни IL-10, GM-CSF, IFN- и TNF- у пациенток с длительностью течения заболевания более 5 лет по сравнению с пациентками, у которых миома матки существовала менее 5 лет (р<0,05).

Обнаружен повышенный уровень IL-10 у пациенток с растущей опухолью (р<0,05), при наличии сопутствующего миоме матки аденомиоза (р<0,05) по сравнению с группой контроля. У пациенток с размером матки, соответствовавшим величине менее 8 недель беременности, уровень IFN- был достоверно выше, чем в группе больных с размером миомы матки более 8 недель (р=0,002). Помимо этого, содержание IFN- в перитонеальной жидкости пациенток с миомой матки обратно коррелировало с размером матки (p=0,029) (рис. 2).

Результаты исследования показали повышение уровня IL-5 у пациенток с единичными миоматозными узлами (менее 5) в сопоставлении с группой больных, имевших множественные миоматозные узлы (5 и более) и группой контроля (р<0,05). Кроме того, интрамуральная и субсерозная локализация узлов также характеризовалась повышенным содержанием IL-5 в перитонеальной жидкости по сравнению с контрольной группой (р<0,05). Эозинофильная инфильтрация миометрия, возможно, сопутствующая повышенной продукции IL-5 в перитонеальной жидкости, является протективным фактором применительно к локализации и количеству миоматозных узлов у пациенток с миомой матки.

Рис. 2. Зависимость между содержанием IFN- в перитонеальной жидкости у больных миомой матки и размером матки (r= –0,50; p=0,029).

Полученные результаты выявили сдерживающую роль Th1-типа иммунного ответа в прогрессировании миомы матки. Подтверждением этому является отрицательная корреляция между размером опухоли и содержанием IFN- в перитонеальной жидкости больных. Кроме того, длительно существующий в миометрии пролиферативный процесс также вызывает активацию иммунной системы преимущественно по Th1 пути, на что указывает увеличение содержания IL-10, GM-CSF, IFN- и TNF- в перитонеальной жидкости больных миомой матки. Антигенная нагрузка в виде патологически измененного коллагена миоматозных узлов приводит к стимуляции клеточного звена иммунного ответа – это выражается в возрастании содержания NK-клеток и Т-клеток (Т-супрессоров и Т-киллеров), в активном состоянии продуцирующих IFN-. Заключение об активации клеточного типа иммунной защиты подтверждается и нашими данными, полученными при исследовании содержания субпопуляций лимфоцитов в периферической крови (системный ответ): отмечено относительное увеличение Т-хелперов и NK-клеток при развитии опухоли больших размеров и многоузловых форм миомы матки.

Вместе с тем, IFN- играет важную роль в процессах воспроизводства и функционирования экстрацеллюлярного матрикса, в частности, коллагена (Buttice G. et al., 2006). Сигнальные пути, подавляющие активность промотора коллагена, активируют IFN- (Ghosh A.K. et al., 1999). Эта закономерность свидетельствует о снижении способности организма к регуляции экспрессии коллагена по мере прогрессирования заболевания. В нашем исследовании отмечена прогностически неблагоприятная ассоциация гиперактивных аллельных вариантов гена коллагеназы ММР-1 с многоузловыми формами миомы матки, быстрым ростом опухоли. Известно, что IFN- блокирует дифференцировку фибробластов в миофибробласты, вызванную TGF- (трансформирующим фактором роста ) (Gu L. et al., 2004). Таким образом, наблюдаемая при миоме матки гиперпродукция TGF-, возможно, сдерживается эндогенно синтезируемым IFN-, что является фактором, замедляющим развитие заболевания. Очевидно, что недостаточность клеточного звена иммунного ответа является одной из предпосылок быстрого развития миомы матки. Увеличение экспрессии IL-10, отмеченное при растущей миоме, может свидетельствовать о неблагоприятной роли Th2-типа иммунного ответа в развитии опухоли.

Роль системы хемокинов в развитии различных клинических вариантов течения миомы матки

Была определена экспрессия мРНК хемокинов – эотаксина, эотаксина-2, IL-8, MIP-1, MIP-1, RANTES и хемокиновых рецепторов – ССR1, CCR3, CCR5, CXCR1, CXCR2 в ткани миоматозного узла и интактного миометрия у 24 больных с различными клиническими формами течения миомы матки.

В результате проведенного исследования было выявлено снижение экспрессии генов эотаксина (р=0,005), MIP-1 (р=0,029), MIP-1 (р=0,003) и CCR5 (р=0,034) в тканях миомы матки по сравнению с миометрием. Указанный факт можно трактовать как нарушение продукции регуляторных факторов (хемокинов и их рецепторов) в патологически измененной ткани вследствие утраты упорядоченной клеточной структуры (рис. 3).

Рис. 3. Содержание мРНК хемокинов эотаксина, MIP-1, MIP-1 и рецептора хемокина ССR5 в тканях миомы матки и миометрия. Различия достоверны при р<0,05.

При простой форме миомы матки, в отличие от пролиферирующей, в опухолевой ткани наблюдалось достоверно сниженное по сравнению с миометрием содержание MIP-1 (р=0,002), ССR5 (р=0,009) и эотаксина (р=0,004). Как показали результаты наших исследований, у пациенток с пролиферирующей формой миомы матки наблюдалось повышенное содержание NK-клеток в периферической крови по сравнению с простой формой опухоли. В связи с тем, что MIP-1 способствует привлечению в ткани матки NK-клеток (Kitaya K. et al., 2003), можно предположить, что эти события взаимосвязаны и участвуют в регуляции пролиферации при миоме матки.

Уровень экспрессии мРНК эотаксина в миометрии был выше при небольшом количестве узлов опухоли (менее 5) (р=0,046). В наших исследованиях было отмечено повышенное содержание IL-5 (фактора роста эозинофилов) в перитонеальной жидкости у пациенток с единичными узлами по сравнению с многоузловой формой миомы. Выявленные закономерности указывают на возможную протективную роль эозинофилов в клинической картине заболевания.

Установленное повышение экспрессии мРНК IL-8 в тканях лейомиомы при субмукозной локализации узлов (р=0,013) по сравнению с экспрессией при других локализациях, вероятно, характеризует вовлечение в патологический процесс нейтрофильных гранулоцитов, приток которых обеспечивает выброс протеолитических ферментов (коллагеназы и миелопероксидазы), содержащихся в гранулах нейтрофилов. Повышенное содержание мРНК MIP-1 (р=0,003) и (р=0,002) в миометрии при субмукозной локализации узлов указывает на бльшую вовлеченность моноцитов и Т-лимфоцитов в патологический процесс по сравнению с другими типами расположения узлов. Повышение содержания мРНК СХСR1 (рецептора IL-8) в миометрии (р=0,035) при субмукозной локализации узлов отражает взаимосвязь между экспрессией генов хемокина и рецептора, выраженную в повышении и IL-8 в тканях миомы матки, а СХСR1 в прилегающих интактных клеточных структурах.

Определена связь между темпами роста и экспрессией ССR5 в миометрии. Повышенное содержание мРНК ССR5 при медленном росте миомы матки по сравнению с быстрым ростом (р=0,003) указывает на важное значение обратной связи между синтезом хемокинов и рецепторов в регуляции течения заболевания. CCR5 – рецептор для MIP-1 и и RANTES; очевидно, что при достаточной экспрессии CCR5 в тканях миометрия система взаимодействия хемокин-рецептор действует как сдерживающий фактор роста миомы матки.

Установленная обратная зависимость между содержанием мРНК MIP-1 и продолжительностью заболевания (p=0,004) иллюстрирует уменьшение способности тканей миомы матки к синтезу хемокина по мере развития опухолевого процесса.

Закономерности, обнаруженные при сопоставлении размеров матки и содержания мРНК IL-8 и MIP-1 в миометрии (прямая взаимосвязь между увеличением матки и содержанием мРНК) (p=0,004 и p=0,02 соответственно), возможно, характеризуют компенсаторное увеличение синтеза указанных хемокинов в ответ на прогрессирование миомы матки. Обратная зависимость между синтезом MIP-1 в ткани лейомиомы и размером матки (как и с максимальным размером узла) (p=0,02 и p=0,047 соответственно) отражает вероятную роль этого хемокина в качестве сдерживающего фактора в развитии патологического процесса.

Отмеченное снижение эотаксина-2 в тканях лейомиомы у пациенток с аденомиозом по сравнению с группой без аденомиоза (р=0,026), вероятно, демонстрирует нарушение в процессе эктопии эндометрия функции эозинофилов. Кроме того, отмечено снижение содержания мРНК СХСR2 в тканях лейомиомы (р=0,031) и MIP-1 в миометрии (р<0,040) у пациенток с аденомиозом, что свидетельствует о недостаточности хемокиновой регуляции.

Таким образом, полученные результаты о содержании мРНК хемокинов и рецепторов в интактных и патологически измененных тканях матки при миоме позволяют говорить о вовлеченности в патологический процесс системы хемокинов. Очевидно, что помимо локальных гормональных нарушений, в качестве пусковых механизмов развития миомы матки следует рассматривать дисбаланс местных межклеточных регуляторных структур, частью которых являются хемокины. Возможным объяснением возникновения миомы матки может быть изначально пониженный уровень экспрессии хемокинов и рецепторов в тканях миометрия, что при гормональных сдвигах приводит к неконтролируемой пролиферации миоцитов и коллагена.

Полученные в исследовании данные свидетельствуют о сложных взаимодействиях иммунных и генетических изменений в патогенезе миомы матки, значимость которых может быть сопоставима с общеизвестными воздействиями гормонального дисбаланса на развитие этого заболевания.

Результаты социальнодиагностического и психодиагностического исследования больных миомой матки с различными вариантами клинического течения заболевания

Результаты психодиагностического исследования позволяют подтвердить имеющиеся в литературе данные о роли в генезе опухолевого роста в матке индивидуально-психологических особенностей больных и справедливость отнесения этого заболевания к группе психосоматических (Ильин В.И., 1988; Брехман Г.И., 1990). Особенности психической сферы (как психическое состояние в конкретный момент, так и более стабильные особенности личности) сказываются на изменении гормонального статуса, что оправдывает психосоматический подход к определенным аспектам эндокринной патологии (Карвасарский Б.Д., 1982).

Проведено обследование 114 больных миомой матки. Пациентки были разделены на две группы: в первую включены 21 женщина с бессимптомной миомой матки; во вторую – 93 пациентки, имевшие клиническую симптоматику, связанную с наличием миомы матки.